Тест-системы E. coli Latex Test Kit

Листовка

Тест-системы E. coli Latex Test Kit предназначены для идентификации E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145, а также E. coli O157:H7 методом латекс-агглютинации.

Кишечная палочка (Escherichia coli, E. coli) – грамотрицательная бактерия, факультативный анаэроб. Она присутствует в кишечнике почти всех видов млекопитающих, включая и человека. Некоторые серовары E. coli полезны для носителя. Они выполняют барьерные функции: не дают патогенным микроорганизмам развиваться в кишечнике хозяина, участвуют в синтезе витаминов, частично расщепляют клетчатку.  Однако существуют и патогенные серовары кишечной палочки.

Среди патогенных кишечных палочек следует отметить энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП, или STEC – от Shiga-toxin-producing Escherichia coli). Они вырабатывают шигеллоподобный токсин и вызывают заболевания типа дизентерии. Для таких заболеваний характерна геморрагическая диарея, а в тяжелых случаях – гемолитико-уремический синдром (ГУС). Из этих патогенных кишечных палочек наиболее известна E. coli O157:H7. Однако существуют и другие серовары, заражение которыми также может приводить к тяжелым интоксикациям в том числе, с летальным исходом: это E. coli O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121 и O145.

Эти бактерии входят в состав нормальной микрофлоры кишечника крупного рогатого скота. С навозом они могут попадать на овощи, фрукты, зелень или же в воду, соки или молоко, а затем – в организм человека. Заражение возможно и при употреблении в пищу загрязненных продуктов из говядины, особенно не подвергавшихся термообработке. Инфекция также может передаваться от человека к человеку при контакте, особенно при использовании общей посуды. Известно, что E. coli O157:H7 способна до 4 суток выживать на различных поверхностях.

Методы реакции латекс-агглютинации (РЛА) для определения E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145, а также O157:H7 были разработаны в 2011 году в. Для реализации этих реакций применяются микросферы латекса, связанные с антителами (иммуноглобулином G) к одному из соответствующих сероваров. При контакте комплекса латекс-антитело с сероваром кишечной палочки, содержащим соответствующий антиген, антитела соединяются с антигеном, и в течение одной минуты происходит их агглютинация. Другие бактерии, включая и иные серовары E. coli, не имеют этих антигенов, следовательно, агглютинация не произойдет.

Метод РЛА не только точен, но и прост: агглютинация видна невооруженным глазом.

В ходе проверки методики ее надежность и чувствительность сравнивали с методами иммуномагнитной сепарации (IMS/ИМС) и твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA/ИФА). Результаты показали, что агглютинация комплекса латекс-антитело происходит при соединении с соответствующими колониями E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 и O157:H7. При контакте с бактериями иных сероваров реакция не происходит. Это означает, что метод специфичен и пригоден для качественного анализа.

Метод РЛА лучше всего подходит для колоний E. coli, выращенных на модифицированном агаре RBA (mRBA) или триптон-соевом агаре с добавлением 5% овечьей крови. Его не следует применять для суспензий колоний или в жидкой среде: в этом случае антитела не смогут соединиться с антигенами и реакция будет отрицательной даже в присутствии E. coli данных сероваров.

Форма:

Каждая тест-система рассчитана на 50 измерений.

1. Отрицательный контроль. Суспензия инактивированной E. coli K12 в буфере, 1 пробирка, 0,5 мл.
2. Положительный контроль. Суспензия инактивированной E. coli выбранного серовара: O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 или O157:H7 в буфере, 1 пробирка, 0,5 мл.
3. Фосфатный буфер (PBS), 1 пробирка, 1 мл.
4. Реактив латекс-антитело. Суспензия частиц красного латекса, соединенного со специфичным к выбранному серовару E. coli: O26, O45, O103, O111, O121 или O145 IgG кролика. 1 пробирка с серой крышкой, 1,5 мл (рассчитана на 50 проб).
5. Контрольный реактив латекса. Суспензия частиц красного латекса с иммуноглобулином пресенсибилизированного кролика. 1 пробирка с красной крышкой, 1,0 мл.
6. Контрольные карты. Одноразовые карты, 5 штук на 10 реакций каждая.
7. Аппликаторы (100 шт).
8. Цветокодированные пипетки (всего 20 шт): зеленые (10), синие (5), красные (5).
9. Инструкция.

Затраты времени:

Анализ: 2-5 минут.

Схема проведения реакции латекс-агглютинации при тестировании на E. coli сероваров O26, O45, O103, O104:H4, O111, O121, O145 и O157:H7

1. Довести реактивы и пробы до комнатной температуры. Перемешать суспензии латекса и контрольные реактивы, встряхнув пробирки.
2. Пипеткой, входящей в комплект (зеленой) нанести одну каплю фосфатного буфера (PBS) в 1 (один) круг на контрольной карте. При анализе нескольких проб использовать дополнительные круги на контрольной карте.
3. Аппликатором или петлей взять пробу с исследуемой колонии и тщательно перемешать в капле фосфатного буфера в одном из кругов.
4. Пипеткой, входящей в комплект (красной) внести 1 (одну) каплю положительного контроля во второй круг.
5. Пипеткой, входящей в комплект (синей) внести 1 (одну) каплю отрицательного контроля в третий круг.
6. Внести 1 (одну) каплю (держа пипетку вертикально) коньюгата латекса с антителом к анализируемому серотипу E.coli в каждый круг (положительный контроль, отрицательный контроль, пробы).
7. Осторожно вращать контрольную карту круговыми движениями, так, чтобы капли совершали полный оборот в трех плоскостях в течение 1 (одной) минуты или до агглютинации (в зависимости от того, что произойдет раньше). Записать результат.
8. Если агглютинировали контрольные реактивы, провести проверку новой пробы из колонии с контрольным реактивом латекса, чтобы убедиться, что изолят не является аутоагглютинирующим штаммом.

Примечание. Все аппликаторы, контрольные карты, прочие материалы и инструменты после использования дезинфицировать или автоклавировать.

Интерпретация результатов

Агглютинация латекса в течение 1 минуты – положительный результат. Это означает наличие кишечной палочки анализируемого серовара. Отсутствие агглютинации в течение 1 минуты – отрицательный результат. Это означает отсутствие кишечной палочки анализируемого серовара.