СТАЙЛАБ предлагает тест-системы SureFood® для количественного анализа ДНК с помощью ПЦР и ИФА. Тест-системы для ПЦР соответствуют ГОСТ Р ИСО 21571-2014, ГОСТ Р 53214-2008, ГОСТ Р 53244-2008, ГОСТ ИСО 21569-2009 и ГОСТ ИСО 21570-2009. Тест-системы для ИФА соответствуют ГОСТ ИСО 21572-2009 и ГОСТ Р 53214-2008.
Подробнее о количественном анализе ДНК
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в современном ее виде разработал К. Мюллис в 1983-1984 годах. Для полимеризации ДНК в ней используется Taq-полимераза – фермент бактерии Thermus aquaticus. В отличие от ДНК-полимеразы большинства организмов, этот фермент способен работать при высоких температурах (до 80°C). ПЦР позволяет за несколько часов значительно увеличить концентрацию определенных фрагментов ДНК с полностью или частично известной последовательностью и получить достаточно материала для исследований. Это называется амплификацией ДНК. При этом происходит экспоненциальное увеличение количества продуктов реакции, что позволяет работать с очень малым числом исходных копий ДНК.
В ходе ПЦР происходит синтез ДНК, комплементарной данной. В буферном растворе помимо фермента находятся дезоксинуклеозидтрифосфаты, из которых строится ДНК, праймеры, к которым фермент присоединяет эти вещества и анализируемый образец ДНК. Иногда смесь включает также внутренние контроли – ДНК, альтернативную искомой, которые используются для проверки эффективности ПЦР, а также красители или флуоресцентные зонды, облегчающие количественное определение ДНК. Цикл ПЦР включает три этапа: денатурацию исходной ДНК (разрыв двойной цепи и образование двух одинарных цепей), отжиг (присоединение к одноцепочечной ДНК праймеров) и элонгацию (достраивание цепи ДНК под действием фермента Taq-полимеразы). В среднем этот цикл повторяется 30-45 раз.
При количественном определении ДНК с помощью ПЦР (ПЦР в реальном времени, real-time ПЦР) измерение продуктов амплификации проводят в ходе их производства, в каждом цикле, что увеличивает чувствительность анализа. Для этого в раствор вводят флуоресцентные красители или зонды, которые связываются с ДНК. Значением порогового цикла (Ct) – уровнем флуоресценции, достоверно превышающим фоновый показатель – обычно считают значение, в 10 раз превышающее фоновое. Чем больше искомого фрагмента ДНК было в пробе, тем быстрее оно будет достигнуто.
В Российской Федерации действуют ТР ТС 022/2011 «Пищевая продукция в части ее маркировки» и ГОСТ Р 51074-2003 «Продукты пищевые. Информация для потребителя. Общие требования». Согласно им, продукция, содержащая 0,9% ГМО и менее не должна маркироваться как содержащая ГМО, если эти организмы или продукты из них не использовались в ходе ее производства. Поскольку продукция, содержащая ГМО, подлежит обязательной регистрации, необходимо проводить количественный анализ ГМО.
Тест-системы SureFood® предназначены для количественного определения содержания ГМО в относительном выражении. Каждый набор включает две системы для проведения ПЦР. Одна из них специфична к трансгенной ДНК, другой – к ДНК анализируемого объекта (кукуруза, соя и др.). Для проведения анализа необходим амплификатор. Все реактивы входят в комплект поставки. К преимуществам количественного ПЦР относят более высокую чувствительность и сниженные требования к организации лаборатории.
Помимо ПЦР возможно провести количественный анализ бактериальных генов в продукции методом иммуноферментного анализа. Тест-системы для ИФА поставляют со всеми необходимыми реактивами. Этот метод пригоден для скрининга проб, поскольку занимает немного времени и не требует дорогостоящего оборудования.
